Rezene (Foeniculum vulgare) tohumundan fenol oksidaz enziminin saflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Kocaeli Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, BİYOLOJİ ANABİLİM DALI, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2019

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: BİNNUR YILDIRIM

Danışman: Yonca Yüzügüllü Karakuş

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Bu çalışmada ekonomik bir bitkisel fenol oksidaz kaynağının bulunması ve enzimin olası uygulama alanlarının belirlenmesi için karakterizasyonu hedeflendi. Bu hedefle, rezene (Foeniculum vulgare) tohumundan enzim Üçlü-Faz Ayırma (TPP) sistemi ile ilk defa bu çalışmada saflaştırıldı ve karakterize edildi. Buna göre, %65 (w/v) (NH4)2SO4 ve 1,0:0,5 oranında enzim/t-bütanol içeren pH 6,0'da (25˚C) hazırlanmış sistemden fenol oksidaz enzimi orta fazda toplandı ve yaklaşık %120 geri kazanım ile 2 kat saflaştırıldı. Enzim alt biriminin molekül ağırlığı SDS-PAGE ile yaklaşık 21,8 kDa, optimum pH ve sıcaklık değerleri ise sırasıyla 7,0 ve 70°C olarak belirlendi. Enzimin Km ve Vmax değerleri sırasıyla 49 mM ve 909 U/mL olarak bulundu. Aktivite boyama sonrası saf enzimde lakkaz ve katekol oksidaz aktivitesi tespit edildi. %10 (v/v) konsantrasyonuna kadar organik çözücülerden etanol, aseton ve dimetilsülfoksit (DMSO) varlığında enzim aktivitesinin kontrole göre %80-84'ünün korunduğu tespit edildi. Ayrıca fenol oksidaz inhibitörü olarak bilinen salisil hidroksamik asit (SHAM), setriltrimetilamonyum bromit (CTAB) ve polivinilpirolidon (PVP) varlığında inhibisyon gözlendi. Sonuç olarak rezene bitki tohumlarının fenol oksidaz kaynağı olarak kullanılabileceği ön görülmekte ve bu bitkiden tek adımda gerçekleştirilen ekstraksiyon metodunun basit, güvenilir, ekonomik ve etkili bir metot olarak enzim preparatı hazırlamada kullanımı önerilmektedir.