Akademik Veri Yönetim Sistemi
Tezin Türü: Doktora
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Kocaeli Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Temel Tıp Bilimleri, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2019
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: Süreyya Mert Selimoğlu
Danışman: Murat Kasap
Özet:
Tümör farklılaşma faktörü (TFF) in vivo ve in vitro ortamlarda uygulandığında, meme kanseri tümör hücrelerini farklılaştırarak invazif niteliklerinin kaybolmasına yol açmaktadır. İlk defa Platica ve diğ. (2004)'nin sıçan hipofiz bezinde TFF'nin kısa formu olan TFF-P1 peptidini kullanarak yapmış oldukları bir çalışma ile böyle bir faktörün varlığı gösterilmiştir. Araştırmacılar bu çalışmada, TFF-P1'in kandaki yarılanma ömrünün oldukça düşük olduğunu gözlemleyerek farelere günde iki kez enjeksiyon yapmak zorunda kalmışlardır. Kandaki kısa yarı ömüründen ötürü TFF-P1'in terapötik amaçlı kullanılması mümkün olmamıştır. Çalışmamızda kısa yarı ömründen dolayı kullanılamayan bu faktörün, renal atılıma daha dirençli ve daha iyi aktivite gösteren bütüncül formdaki TFF proteinin üretilmesi amaçlanmıştır. Ayrıca çalışmamız kapsamında bütüncül TFF proteinine IgG1-Fc uzantısı eklenerek hem kandaki yarılanma ömrü daha uzun, hem de immün sistemi tetikleyebilir nitelikte bir terapötiğin üretilmesi ve in vitro ortamda test edilmesi gerçekleştirilmiştir. Yöntem: Yapılan çalışmalarda in silico tasarım, modelleme ve sonrasında HEK293F süspanse hücre hattı kullanılarak bütüncül TFF üretimi gerçekleştirilmiştir. Üretim ve saflaştırma çalışmaları sonrasında elde edilen bütüncül rekombinant TFF proteini'nin (rTFF) doğrulanması amacı ile LC-MS/MS, SDS-PAGE ve western blotlama analizleri yapılmıştır. Hedeflenen şekilde üretildiği kanıtlanan protein, HeLa hücre hattı, MCF-7 hücre hattı ve bir hastanın invazif meme tümör dokusundan elde edilen primer hücre hattı üzerinde hücre canlılığı, proliferasyon ve önemli tümör markırlarına ilişkin in vitro etkinlik testlerine tabi tutulmuştur. Bulgular: Yapılan testler neticesinde, elde edilen rTFF'nin hedeflenen şekilde eksprese edildiği, başta MCF-7 hücre hattı olmak üzere yeni geliştirilen primer hücre hattı üzerinde yüksek aktivite gösterdiği ve bu şekilde hücrelerin farklılaşarak malignant karakterden, benign bir karaktere farklılaşmalarında başarılı olunduğu gösterilmiştir. Sonuç: Çalışmamız kapsamında özgün bir tasarım ile geliştirilen rTFF proteininin meme tümörü hücreleri üzerinde terapötik etki gösterme potansiyeline sahip olduğu belirlenmiştir.