Termofilik bir küf olan Scytalidium thermophilum'dan proteaz enziminin üretimi, saflaştırılması ve kısmi karakterizasyonu

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Kocaeli Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, BİYOLOJİ ANABİLİM DALI, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2021

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: GÜLEN SİNEM İNCİ

Danışman: Yonca Yüzügüllü Karakuş

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Protein yapısındaki peptit bağlarının hidrolizinden sorumlu olan proteazlar, oldukça geniş bir grubu temsil etmektedir. Çalışmada, termofilik bir küf olan Scytalidium thermophilum'dan hücre dışı proteaz enziminin optimum fermantasyon koşullarında üretimi, saflaştırılması ve kısmi karakterizasyonu amaçlandı. Buna göre, %4 (a/h) glukoz, %1 (a/h) maya ekstraktı, %0,05 (a/h) MgSO4.7H2O, %0,04 (a/h) KCl ve %0,1 (a/h) K2HPO4 içeren 250 mL YpSS Broth besiyerinde büyütülen mikroorganizmadan üç günlük fermantasyon sonunda hücreler uzaklaştırılarak ham enzim ekstraktı elde edildi. Saflaştırma hem klasik kromatografi hem de sulu ikili faz sistemi (ATPS) uygulanarak gerçekleştirildi ve saflaştırma bulguları karşılaştırıldı. ATPS'ye maruz bırakılan ham ekstrakt örneğinden 5,1-kat ve %78 aktivite geri kazanımla proteaz enzimi saflaştırıldı. HiPrep Q XL (16/10) kolonundan ise proteaz enzimi %22 geri kazanımla yaklaşık 3-kat saflaştırıldı. SDS-PAGE'de her iki yolla saflaştırılan proteaz örneğine ait tek bant gözlendi, protein bandının molekül ağırlığı ⁓80 kDa olarak hesaplandı. Enzimin optimum sıcaklık ve pH değerleri sırasıyla 60 °C ve 8,0 olarak tespit edildi. Kararlı olduğu sıcaklık aralığı 30–60 °C, pH aralığı ise 4,0–9,0 olarak belirlendi. S. thermophilum'dan ilk defa bu çalışmada saflaştırılan proteaz enziminin sıcaklık ve pH değişimlerine gösterdiği kararlılık, enzimin farklı endüstriyel uygulamalarda kullanımına yatkın olduğuna işaret etmektedir