Bacillus pumilus Y7 TARAFINDAN ÜRETİLEN KATALAZ ENZİMİNİN SAFLAŞTIRILMASI VE KARAKTERİZASYONU

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Kocaeli Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Fen Bilimleri Enstitüsü, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2018

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: Semih Işık

Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): YONCA YÜZÜGÜLLÜ KARAKUŞ

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Katalazlar (EC 1.11.1.6) antioksidan metalloenzimler sınıfına dahil olup başlıca işlevleri hidrojen peroksidin su ve moleküler oksijene parçalanmasıdır. Katalazlarla ilgili günümüzde yeni bulgular elde edilmektedir. Bu bulgulardan en çarpıcı olanı farklı kaynaklardan izole edilen bazı katalazların temel fonksiyonlarının yanında düşük seviyede oksidaz ve(ya) peroksidaz aktivitesi göstermelerinin keşfedilmesidir. Bu çalışmada Bacillus pumilus Y7 katalazının İkili Faz Ayırma Sistemi (ATPS) ile düşük maliyette ve yüksek verimde saflaştırılması amaçlanmıştır. Buna göre Luria Broth besiyerinde 37°C, 18 saat ve 200 rpm çalkalama hızında büyütülülen B. pumilus Y7 izolatından 7990 U (12 U/g) katalaz içeren ham enzim ekstraktı elde edilmiştir. %10 (a/a) Na2SO4, %15 (a/a) PEG4000 ve %3 (a/a) NaCl içeren pH 7,0'da hazırlanmış sistemden katalaz enzimi %123 verim ile 4,7 kat saflaştırılmıştır. Saflığın kontrolü SDS-PAGE ile gerçekleştirilmiş olup 59 kDa molekül ağırlığına sahip tek bir bant gözlenmiştir. Ayrıca saf enzimin KM-app değeri (11 mM), optimal sıcaklığı (37°C) ve optimal pH'sı (7,0) belirlenmiştir. Enzimin 30 ila 50°C 'de ve pH 7,0 ila 9,0 arasında kararlı olduğu belirlenmiştir. Aktivite boyama sonucu enzimde ikincil peroksidaz aktivitesinin varlığı tespit edilmiştir. Ayrıca %2,5 (h/h) konsantrasyonunda organik çözücülerden etanol, metanol, aseton ve DMSO'ya karşı dayanıklı olduğu tespit edilmiştir. Sonuç olarak B. pumilus Y7 izolatının literatürde adı geçen diğer hücre içi katalaz üreticilerine göre yüksek miktarda enzim ürettiği bulunmuştur. Bu enzimin ATPS ile yüksek verimde alt fazda saflaştırıldığı tespit edilmiştir. Bu sayede oldukça pahalı ve enzim kaybına neden olan kromatografik yöntemler yerine zamandan tasarruf sağlayan, maliyeti ucuz ve kullanımı oldukça kolay olan ATPS sisteminin katalaz enzim saflaştırılmasında tercih edilebileceği gösterilmiştir.