Aspergillus fumigatus katalazının üretimi, saflaştırılması ve karakterizasyonu

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Kocaeli Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, BİYOLOJİ ANABİLİM DALI, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2019

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: CEREN AĞGEZ

Danışman: Yonca Yüzügüllü Karakuş

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Bu çalışmada Aspergillus fumigatus'dan katalaz enziminin optimum üretimi, kromatografik yöntemle saflaştırılması ve enzimin biyokimyasal özelliklerinin belirlenmesi hedeflendi. Bu hedef doğrultusunda 37°C ve 155 rpm çalkalama hızında %1 (a/h) glukoz ve 0,5 mM H2O2 içerecek şekilde hazırlanan 1 litrelik YpSs besi ortamında büyütülen A. fumigatus'dan 7. günde ham enzim ekstraktı elde edildi. Daha sonra enzim tek basamakta küf özütünden %42 geri kazanımla 4 kat kısmi olarak başarıyla saflaştırıldı. SDS-PAGE analizi ile molekül ağırlığı ~70 kDa olarak hesaplandı. Enzimin optimum reaksiyon sıcaklığı 60°C, pH'sı ise 7,0 olarak belirlendi. Km ve Vmax değerleri sırasıyla 7,4 mM ve 1250 μmol-1 dak L olarak ölçüldü. Kararlılık testleri enzimin geniş bir pH (4,0-9,0) ve sıcaklık (30°C-50°C) aralığında aktif olarak kalabildiğini gösterdi. Ayrıca bazı organik çözücüleri, konsantrasyona ve inkübasyon süresine bağlı olarak tolere edebildiği bulundu. Son olarak, peroksit yokluğunda 4-metil katekol ve pyrokatekol gibi fenolik bileşikleri okside edebildiği keşfedildi. Özetle, A. fumigatus'dan katalaz enzimi iyon değiştirme kromatografi yöntemi ile tek basamakta ilk kez bu çalışmada saflaştırıldı. Enzimde belirlenen biyokimyasal özellikler (düşük Km değeri, termostabilite, vb.), katalazın farklı endüstriyel uygulamalar için iyi bir biyokatalizör adayı olacağını göstermektedir.